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介紹下Elisa試劑盒的檢測原理

更新時間:2025-07-24 點(diǎn)擊次數(shù):191次
  ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒的檢測原理基于抗原-抗體特異性結(jié)合和酶催化反應(yīng)的特性。以下是ELISA試劑盒檢測原理的詳細(xì)解釋:
  1.固相化抗原或抗體:首先,將抗原或抗體固定在固相載體上,通常是聚苯乙烯微孔板。這一步驟使得抗原或抗體可以穩(wěn)定地吸附在板上,便于后續(xù)的檢測步驟。
  2.樣品加入:待測樣品(如血清、尿液、組織提取物等)被加入微孔板中。如果樣品中含有目標(biāo)抗原或抗體,它們將與固相載體上的相應(yīng)抗體或抗原發(fā)生特異性結(jié)合。
  3.洗滌:未結(jié)合的樣品成分被洗滌去除,以減少非特異性反應(yīng)和背景干擾。
  4.加入酶標(biāo)記的二抗:如果檢測的是抗體,則加入酶標(biāo)記的二抗(通常是與樣品中抗體特異性結(jié)合的抗體)。如果檢測的是抗原,則加入酶標(biāo)記的一抗(通常是與樣品中抗原特異性結(jié)合的抗體)。這些酶標(biāo)記的二抗或一抗能夠與固相載體上的抗原或抗體結(jié)合。
  5.再次洗滌:未結(jié)合的酶標(biāo)記抗體或一抗被洗滌去除。
  6.底物加入:加入底物溶液,底物在酶的催化下發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化。
  7.顯色反應(yīng):酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),顏色的深淺與樣品中目標(biāo)抗原或抗體的濃度成正比。
  8.終止反應(yīng):加入終止液停止酶促反應(yīng),使顏色穩(wěn)定。
  9.讀數(shù):使用酶標(biāo)儀在特定波長(通常是450nm)下測量微孔板中每個孔的顏色強(qiáng)度(吸光度值)。吸光度值與樣品中目標(biāo)抗原或抗體的濃度相關(guān)。
  通過比較樣品孔的吸光度值與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品孔的吸光度值,可以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而定量分析樣品中目標(biāo)抗原或抗體的含量。
  ELISA試劑盒因其高靈敏度、特異性和易于操作等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、藥物研發(fā)、食品安全檢測、環(huán)境監(jiān)測和基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域。

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